皮內試驗是(shì)在模擬異位(wèi)性皮炎——使皮膚接觸空氣抗原,並觀察其反應。試驗的特異性為50-90%(排(pái)除其他瘙癢症特異性將提高),敏感性為90%。對於季節性(xìng)發病的動物,試驗(yàn)時間最好選擇在症狀出(chū)現的2-3個月後。 操作程序: 1.將動(dòng)物鎮靜並側臥。賽拉嗪(Xylazine)0.5-0.75mg/kg,或美托咪定(medetomidine)10-20μg/kg,是適合的鎮靜劑。很多其他的麻醉或鎮靜(jìng)劑會降低皮內(nèi)試驗的反應性。 2.將胸廓輕柔剃(tì)毛,麵(miàn)積為15×10cm。 3.預先用黑色記號筆標出注射點。 4.將每種抗原以0.05ml的劑量注(zhù)射入標記點對應的真皮內(nèi),同樣劑量的組胺(àn)(1:100,000)作為陽性對照,生(shēng)理鹽水作為陰性對照。 5.10-20分鍾(zhōng)後讀取反應結果。皮膚會(huì)出現風疹樣變化,陽(yáng)性對照為4分,陰性對照為0分。其(qí)他注射部(bù)位通過風疹麵積、發紅程度、隆起高度與陽性和陰性(xìng)對照相比,人為(wéi)給予評分。最高分為4分,最低分為0分。 6.少數病例(lì)會在24-48小時後出現遲發型變態反應,需要主人(rén)在家觀察,或住院觀察。 7. 最為(wéi)脫敏治療(liáo)的(de)抗原(yuán)種類不(bú)要超過10種,注射劑量從低濃度(dù)向高濃(nóng)度逐漸遞增,注射間隔逐漸拉(lā)長,從最初的間隔一天,到最後可能保持在(zài)10-20天注射一(yī)次。通常為終生性治療。 皮內注射時注射技術問題導致(zhì)局部刺激,可能引起(qǐ)假陽性反應(yīng),例如針頭損傷、注入空氣和抗原容(róng)量(liàng)大於對照組(zǔ)。假陰性反應可能緣於藥物(wù)幹擾(例如(rú)糖皮質激素、抗組胺藥,降(jiàng)血壓藥等)。理論上講,應激可以(yǐ)導致自體糖(táng)皮質激素升高(gāo),使皮膚過敏試驗(yàn)無反應。注射技術錯誤,例如注射於(yú)皮下而不是皮內;或(huò)是抗(kàng)原量(liàng)過低,讓皮膚不能形成應有的反應;抗原過期或過度稀釋等(děng)因素均使結果為假陰性。 皮內試驗(yàn)前要停用所(suǒ)有糖皮質激素和抗(kàng)組胺藥(見表1);試驗時需要剃毛,並(bìng)鎮靜(jìng)動物;另(lìng)外需要購買多種抗(kàng)原試劑,並合理保存;醫生(shēng)判讀結果的能力需要特殊的培訓。由於上述原因,在歐美等國家(jiā),做皮內試驗的病例需要轉診至皮膚病專科(kē)醫(yī)院(yuàn)。 目前世界知名的犬過敏原生產公司(sī)有Greer、Heska、Artuvetrin等。國際衛生組(zǔ)織已經建立了人醫用抗原標準化,而獸醫用(yòng)抗原則沒有標準化。因此無從得知(zhī)哪家公(gōng)司的產品(包括人醫和獸醫)更有優勢,。獸醫臨床常將水性抗原提取物用於皮內試(shì)驗。抗原的儲存基質是甘油。抗原均為濃縮製劑,更適合作為疫苗(miáo),用於脫敏治(zhì)療,稀釋後(hòu)才能用作皮內試驗的試(shì)劑。通常稀釋後的抗原保存時(shí)間變短,即使正確存放(fàng),通(tōng)常(cháng)必須在8周內用完。 皮膚病醫生根據當地的植物群等選擇抗原,抗原種類越多越好,當然費用也會隨之升高。當地抗原的信息可以到過敏實驗室、獸醫皮膚病(bìng)專科醫院、人醫變態反應科室(shì)和氣象局等處了(le)解(jiě),也可以(yǐ)查閱獸醫過敏性皮(pí)膚病的文獻和教科書。需要注意的是(shì),對人重要的抗原未必對犬也同(tóng)樣重要。即使植物和傳粉很確定的區域(yù),植被(bèi)和氣候也存在變數。所以應該每年評估皮內試驗用抗原的種類,並且製(zhì)定新的抗原種類,很少出現陽性反應(yīng)的抗原應該剔除掉。大(dà)量環境抗原涉及於犬AD的發病機製中(zhōng)。 眾多專家和學者通過皮內試驗總結了(le)AD犬反應陽性(xìng)的空氣抗原種類。常用抗原包括屋塵、表皮蟎屬、各種皮屑、樹種、草和雜草、花粉、黴菌及其他混雜抗原。表皮蟎屬包括:美(měi)洲塵蟎(也稱粉塵滿(mǎn))、歐洲塵蟎(也稱房塵蟎或屋塵蟎)、粗腳(jiǎo)粉蟎、腐食酸蟎;上皮抗原包括:人上皮、馬上皮、貓上皮、犬上皮、綿羊上(shàng)皮、混合羽毛、鼠(shǔ)上皮、兔(tù)上皮、豚鼠上皮、家禽上皮、金絲(sī)雀上皮(pí)等;樹種包括:樺(huà)樹、柳樹、樅樹、雪鬆、槭樹、胡桃、榛子、榿木、橡樹、山(shān)毛櫸、榆樹、山胡(hú)桃、白楊、紅雪鬆、白鬆、小無花果樹、櫟樹、柏樹、橄(gǎn)欖樹(shù)、接骨木等;草類(lèi)包括:梯牧草、肯塔基蘭草、狗(gǒu)牙根、車(chē)前草、小糠草、羊茅草、小麥、大麥、玉米、豕草、菸草、艾蒿、蕁(qián)麻、刺藜、蒼耳、鴨茅等;花粉包(bāo)括:黃菊、苜蓿、假豕草(cǎo)、蒲公英、向日葵、玫瑰、金盞花、野菊花、雛菊、芥菜、紅三葉草等;黴菌類包括:鏈(liàn)格孢屬、曲黴、芽(yá)黴菌、單孢枝黴、毛黴、皰黴、假頭孢子、葡萄孢、根(gēn)黴、長蠕孢菌、根生菌、青(qīng)黴菌、附球菌、梭黴菌、分枝孢子菌(jun1)、彎孢黴、紅酵母、大麥黑(hēi)粉菌、燕麥黑粉菌、小麥黑粉(fěn)菌;其他還包(bāo)括(kuò):煙草、棉花、報紙、木絲綿、蟑螂等。很(hěn)多廠家在生產抗原時,會將多種同類抗原混合,合並為一種試劑。 抗原的種類繁多,且地理環境和生活方式的不同,不(bú)同地區的AD犬的陽性反應抗原差異很大,非常分散,很難製(zhì)定統一的抗原檢測套餐(cān)。例如,貓上皮是廣泛分布的抗原,AD犬對此抗原的反應率在某地為71%,而另一地為2%。同樣世界性分布的曲黴,不同調查的發現從84%到0%。 各(gè)地(dì)存在的抗原致敏率的差異可能是由於不(bú)同的生產廠家、不同的生產批次(cì),以及不同的抗原生物活性導(dǎo)致的,另外,皮內試驗操作時的劑(jì)量(liàng)和濃度也不盡統一(yī),抗原製劑的(de)佐劑(jì)也可能引發皮膚反應。皮內(nèi)試驗的假陰性或假陽性結果隨(suí)之出現。 總(zǒng)結皮內試驗檢測(cè)的抗原(yuán)致敏率,沒有發現一種特殊的(de)抗(kàng)原能夠被確定一定(dìng)致敏,也沒有一種抗原能夠完全被排除出致敏(mǐn)行列。總的來(lái)說,塵蟎類和上皮類在歐美的調(diào)查(chá)中(zhōng)都是致敏率(lǜ)很高的抗(kàng)原,而花粉和黴菌在美(měi)洲重要,在歐洲卻相對次要。
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